海洋微藻粗脂肪、EPA 和DHA 含量的測定

在自然界中,能夠合成EPA 和DHA 的生物只有部分海洋微藻和少量細菌,其中海洋微藻作為海洋生態(tài)體系中的主要初級生產(chǎn)力,通過食物鏈為高級的動物直接或間接提供多不飽和脂肪酸,其中魚體內(nèi)的EPA 和DHA 即是通過食用海洋微藻而獲得的。因此,研究海洋微藻中EPA 和DHA 的含量有重大意義。該文就八種海洋微藻中EPA 和DHA 含量做一分析測定,為海洋微藻的開發(fā)利用提供依據(jù)。

1 　材料和方法

1. 1 　材料

實驗用的微藻為1 號三角褐指藻(Phaeodactylumtricornuru) ,2038 ;2 號中肋骨條藻(Skeletonema costa2tum) , 2042 ; 3 號新月菱形藻(Nitzschia closterium) ,2034 ; 4 號等鞭金藻(Chrysophyceae isochrysis galba2na) ,3011 ;5 號綠色巴夫藻(Pavlova viridis) ,3012 ;6 號小球藻(Chlorella miutissima ) , 1014 ; 7 號微擬球藻(Nannochloropsis oculata) ,1001 ; 8 號紫球藻( Porphy2ridium cruentum) ,8001 ,;培養(yǎng)液采用fP2 加富的米勒氏工人海水; 實驗所用的試劑均為分析純;721 可見分光光度計;離心機;電熱恒溫水浴鍋;sp6800a 型氣相色譜儀；SZF-06B粗脂肪測定儀、粗纖維測定儀。

1. 2 　方法

1. 2. 1 　微藻培養(yǎng)方法　自然光照, 平均光強為6000LX,亮暗比為16∶8 ,靜止培養(yǎng),每天定時搖晃兩次。溫度23 ±2 ℃。

1. 2. 2 　收獲　對數(shù)生長期末期收獲,測定OD680 ,4000rPmin 離心,藻體真空干燥后稱重備用。

1. 2. 3 　樣品制備方法　離心好的藻體按Bligh - Dy2er 方法〔2〕提取脂肪,減壓蒸餾并迅速稱重后轉(zhuǎn)移到25mL 磨口試管中用N2 將溶劑吹干后, 加入5mL2molPL 的氫氧化鉀2甲醇溶液充N2 后密封。置于75 ℃水浴中酯化40min ,冷卻后加入正己烷(分兩次)提取脂肪酸甲酯。提取液轉(zhuǎn)移到5mL 錐形具塞離心管中,用N2 吹干后,加入正已烷溶解后供色譜分析〔3～5〕。

1. 2. 4 　氣相色譜分析　氣相色譜分析條件:色譜柱為不銹鋼填充柱(2m ×3mm) ,擔(dān)體為洛母沙伯,填充16 %的DEGS。載氣為N2 , 流速為30mLPmin , 不分流,恒溫190 ℃。氫火焰檢測器,溫度為250 ℃。衰減為4 ,靈敏度為4。進樣量為2μL 。脂肪酸的確定參照標準樣品來進行,采用外標法定量。

2 　結(jié)果與討論

2. 1 　粗脂肪含量

此實驗微藻收獲密度、生物量和粗脂肪含量如表1。綠藻門收獲密度最高,其中小球藻收獲OD6801. 372 ,生物量為491. 2mgPL ,粗脂肪為干重的26 %;而金藻門收獲密度最低,生物量為61. 8mgPL ,但是粗脂肪含量最高為干重的57 %;硅藻門3 株微藻收獲密度分別為0. 592 ,0. 710 ,0. 724 ,其中3 號藻具有最大的生物量為509. 4mgPL ,粗脂肪含量占干重的26 %; 紅藻門的紫球藻個體較大, 其生物量為475. 6mgPL ,粗脂肪僅占干重的5 %。