粗脂肪酶活力的測(cè)定方法的研究

脂肪酶又稱甘油酯水解酶, 它能催化甘油三酯水解生成甘油二酯或甘油一酯或甘油和脂肪酸。粗脂肪酶由于保存不當(dāng)或放置時(shí)間較長(zhǎng), 常常會(huì)使活力下降, 因此, 使用時(shí)必須對(duì)粗脂肪酶活力進(jìn)行測(cè)定。檢測(cè)脂肪酶活力的方法有很多種, 所使用的底物也很多, 各有優(yōu)缺點(diǎn)。目前為止, 還沒(méi)有一種統(tǒng)一的檢測(cè)手段, 各生產(chǎn)廠家和科研部門通常根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)條件來(lái)制定各自的檢測(cè)方法。反映脂肪分解程度的指標(biāo)有酸價(jià)、碘價(jià)、皂化價(jià)、過(guò)氧化值等。本實(shí)驗(yàn)用酸價(jià)作指標(biāo), 用95%乙醇作終止劑, 通過(guò)酸價(jià)的測(cè)定反映脂肪酶分解脂肪的程度, 從而求得酶活力。旨在探討一種新的快速的測(cè)定粗脂肪酶活力的一種方法。

1　材料與方法

1.1　實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1　食用色拉油: 市售

1.1.2　生物試劑

粗脂肪酶，標(biāo)準(zhǔn)脂肪酶；

1.1.3　化學(xué)試劑

酚酞指示劑95%乙醇溶液0105 mol/LNaOH溶液

1.1.4　主要儀器設(shè)備

電熱恒溫水浴鍋　微量滴定管　電子天平 SZF-06A粗脂肪測(cè)定儀  纖維測(cè)定儀

1.2　方　　法

1.2.1　粗酶液的制備

用電子天平分別稱取粗脂肪酶0.010 g、0.020 g 和0.030 g, 用蒸餾水溶解并定容至100 mL, 配成濃度分別為0.01%、0.02% 和0.03%的粗酶液。

1.2.2　實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

本實(shí)驗(yàn)以10 mL色拉油為底物,以酶用量、水解溫度、反應(yīng)時(shí)間為因素,通過(guò)酸價(jià)的測(cè)定選定其水解的最佳條件。正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)見表1和表2。