毛細(xì)管柱氣相色譜法測(cè)定中草藥中8 種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留

有機(jī)氯農(nóng)藥是一類曾被世界廣泛適用的廣譜殺蟲劑。其中六六六( HCH) 和滴滴涕(DDT) 使用時(shí)間長(zhǎng),用量大,范圍廣,雖已禁用多年,由于其脂溶性、半衰期長(zhǎng)和難降解的特性,長(zhǎng)期積存在環(huán)境中,尤其是在土壤中含量較高 ,進(jìn)而遷移至植物、蔬菜,中草藥中。近年來,回歸自然的潮流使人們對(duì)綠色藥品更為關(guān)注,世界各國(guó)對(duì)天然藥物的需求日益擴(kuò)大,但自上個(gè)世紀(jì)以來,中草藥的農(nóng)藥殘留,特別是有機(jī)氯的殘留已成為我國(guó)中草藥走向國(guó)際市場(chǎng)的主要障礙,因此,使我國(guó)中草藥有機(jī)氯農(nóng)藥的研究標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化具有十分重要的意義。我國(guó)已經(jīng)制定了果蔬、食品及油脂中HCH 和DDT 的國(guó)標(biāo)檢測(cè)方法和限量標(biāo)準(zhǔn),而中草藥農(nóng)藥殘留的國(guó)標(biāo)檢測(cè)方法和限量標(biāo)準(zhǔn)還很少 。本研究通過對(duì)人參、丹參、甘草桔梗等植根類中藥有機(jī)氯測(cè)定,建立了毛細(xì)管柱氣相色譜法測(cè)定4 種中草藥中8 種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留方法,為中草藥中農(nóng)藥殘留檢測(cè)提供有效的分析方法。

1 　實(shí)驗(yàn)部分

1. 1 　主要儀器與試劑　GC - 6820 氣相色譜儀配ECD 檢測(cè)器,DB - 5 石英毛細(xì)管柱(30. 00m ×0. 32mm ×0. 25m) 。DDT 和HCH 標(biāo)準(zhǔn)品;取DDT 和HCH 混合標(biāo)準(zhǔn)品(含4 種滴滴涕異構(gòu)體及4 種六六六異構(gòu)體) ,先用正己烷溶解配成100μg/ L 的儲(chǔ)備液,臨用時(shí)再用正己烷逐步稀釋,配制成標(biāo)準(zhǔn)工作液。丙酮、石油醚及正己烷均為色譜純,無水硫酸鈉(650 ℃灼燒5h) ,氯化鈉(120 ℃烘4h) ,氟羅里硅土(120 ℃烘4h) ,固體試劑冷卻后均于干燥器中保存。測(cè)土儀，（測(cè)量土壤中養(yǎng)分的含量，如氮、磷，這些也是農(nóng)殘殘留的一方面）。土壤溫濕度記錄儀。

1. 2 　實(shí)驗(yàn)方法

1. 2. 1 　樣品預(yù)處理　準(zhǔn)確稱取已充分粉碎的樣品5g 于250ml 三角燒瓶中,加入萃取劑100ml (正己烷40ml + 石油醚40ml + 丙酮20ml ) , 浸泡4h , 在搖床中震搖1h , 超聲提取30min ,經(jīng)玻璃砂芯漏斗過濾,靜置分層。轉(zhuǎn)移上層有機(jī)相,并使其通過10cm 高無水硫酸鈉玻璃小柱,并用正己烷少量多次潤(rùn)洗,80 ℃水浴蒸發(fā)至2ml ,待凈化。

1. 2. 2 　樣品的凈化　在玻璃層析柱中加入2cm 高的無水硫酸鈉,8g 氟羅里硅土,再加入2cm 高的無水硫酸鈉,敲實(shí)。取20ml 正己烷倒入層析柱中潤(rùn)濕吸附柱, 待正己烷接近上層無水Na2 SO4 時(shí),將濃縮液轉(zhuǎn)移至層析柱中, 并用正己烷洗滌濃縮瓶3 次,洗滌液并入層析柱中,收集凈化液, 待濃縮液接近上層無水硫酸鈉時(shí), 以正己烷∶丙酮( 9 ∶1) 淋洗層析柱,并入濃縮瓶中80 ℃水浴蒸發(fā)近干,用正己烷定容至1ml ,供氣相色譜分析。

1. 2. 3 　色譜條件　進(jìn)樣口溫度250 ℃, 電子捕獲檢測(cè)器溫度300 ℃,載氣、輔助氣均為高純氮?dú)?純度99. 999 % ,載氣流速:2. 0ml/ min ,進(jìn)樣方式:不分流進(jìn)樣,色譜柱升溫程序:柱溫150 ℃維持4min ,再由8 ℃/ min 升至220 ℃,保持12min ,再由20 ℃/ min 升至270 ℃,保持5min。進(jìn)樣量1μl 。

2 　結(jié)果

2. 1 　線性范圍與檢出限　用正己烷將100μg/ ml 的儲(chǔ)備液分別稀釋成不同質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行實(shí)驗(yàn),并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,試驗(yàn)結(jié)果表明,被測(cè)組分質(zhì)量濃度在0. 01～5. 00μg/ ml的范圍內(nèi)與其色譜峰面積呈線性關(guān)系。HCH 和DDT 8 種組分的線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)及方法檢出限(S/ N = 3) 見表1

2. 2 　方法加標(biāo)回收率及精密度　在優(yōu)化后的色譜條件下進(jìn)行日內(nèi)和日間精密度試驗(yàn)。分別取低、中、高三種濃度的標(biāo)準(zhǔn)液,每種濃度在1d 中測(cè)試6 次,得日內(nèi)精密度(RSD) 在3. 1 %

～5. 4 %之間,同樣3 種濃度內(nèi)日測(cè)試1 次,連續(xù)測(cè)試6d ,得日間精密度在4. 5 %～9. 6 %之間。平行取7 份相同中草藥樣品(桔梗) 分別加入二種濃度的混標(biāo)溶液,由于中草藥中有機(jī)氯的含量較低,因此選低中二個(gè)濃度進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn), ,然后按試驗(yàn)方法進(jìn)行提取、凈化及氣相色譜測(cè)定( n = 7) ,結(jié)果見表2 。

2. 3 　樣品的測(cè)定　準(zhǔn)確稱取4 種中草藥,按“1. 2”項(xiàng)處理,以外標(biāo)法定量,測(cè)得農(nóng)藥殘留結(jié)果見表3 ,8 種有機(jī)氯標(biāo)準(zhǔn)及樣品色譜圖見圖1 。

3 　結(jié)論

本文建立了4 種植根類中草藥中8 種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留的氣相色譜測(cè)定方法,方法操作簡(jiǎn)便,準(zhǔn)確度高。從測(cè)定結(jié)果看,8 種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留在這四種草藥中均有檢出。其中β- HCH 含量最高,P , P′- DDD 最低,參考2000 版藥典中對(duì)黃芪甘草項(xiàng)下對(duì)HCHs 和DDTs 的限量標(biāo)準(zhǔn) ,檢測(cè)的4 種中草藥樣品有機(jī)氯殘留均未超標(biāo)。