乳制品中三聚氰胺的高效液相色譜檢測法

三聚氰胺（Melamine）是一種重要的三嗪類含氮雜環(huán)有機化工原料，主要用于生產(chǎn)三聚氰胺-甲醛樹脂，廣泛用于木材加工、塑料、涂料、造紙、紡織、皮革等行業(yè)，為白色晶體。三鹿奶粉事件引發(fā)了對三聚氰胺檢測的廣泛關(guān)注，國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局和國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會相繼發(fā)布了《原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測方法》（GB/T22388-2008）和《原料乳中三聚氰胺快速檢測 液相色譜法》（GB/T22400-2008）的國家標(biāo)準(zhǔn)。本文參考了以上標(biāo)準(zhǔn)并進(jìn)行配制條件優(yōu)化，建立了液相色譜檢測法，前處理簡單，檢測限、精密度、重現(xiàn)性以及回收率均符合國家標(biāo)準(zhǔn)。

 

高效液相色譜儀（含UV1620紫外-可見檢測器1臺，P1620高壓恒流泵1臺；AT-330色譜柱溫箱；FA2004分析天平；TGL-16G-A離心機；三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品>99%；辛烷磺酸鈉(色譜純)；磷酸(分析純)、乙腈(色譜純)、純凈水。

精密稱取三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品，溶于50％的甲醇水溶液，配制稱1.422mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，于4℃避光保存。根據(jù)實驗需要，用流動相逐級稀釋成適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

稱取2g酸奶樣品與50ml具塞離心管中，加入乙腈：水＝50：50混合溶液15ml，充分混勻后超聲提取15min。取提取液250ul，加入0.1mol/l鹽酸750ul，混勻，以12000r/min離心5min，取上清液，0.22um濾膜過濾，作為HPLC測定溶液。

色譜柱：Globalsil C18 5μm(ID4.6mm×250mm)

流動相：乙腈/緩沖鹽=15/85（緩沖鹽：10mM辛烷磺酸鈉水溶液，含0.1％磷酸）

流速：1.0ml/min

波長：240nm

溫度：40℃

進(jìn)樣量：20μl

 

取濃度為0.569μg/ml三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)工作液，按上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣5次，以各成分峰面積計算RSD(%)，所得結(jié)果如表1所示：保留時間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.23％，峰面積RSD為0.57％。

表1 精密度實驗

NO.	Retention time（min）	Peak High	Peak Area
1	11.933	289	4216.8
2	11.990	290	4264.2
3	11.928	287	4246.0
4	11.927	287	4242.8
5	11.923	284	4218.6
RSD(%)	0.23	0.82	0.57

圖1 三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品

配置濃度分別為0.142、0.284、0.853、1.422、7.110、14.220μg/mL的三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)工作液。將以上6種標(biāo)準(zhǔn)工作液在上述色譜條件下按濃度由低至高進(jìn)樣。用最小二乘法以對照品濃度(橫坐標(biāo)X軸，µg/ ml)對峰面積(縱坐標(biāo)Y軸)進(jìn)行線性回歸，求算標(biāo)準(zhǔn)曲線。

取已知三聚氰胺含量的酸奶樣品，加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，按“樣品前處理” 操作，平行制備3份，得到樣品溶液后按上述色譜條件進(jìn)樣分析，得到加樣回收率及重現(xiàn)性結(jié)果，見表2。

表2 加樣回收率和重現(xiàn)性（n=3）

圖2 空白酸奶樣品

圖3 加標(biāo)酸奶樣品

依據(jù)噪聲值，按3倍信噪比，計算其理論檢出限，為0.221 mg/kg；按10倍信噪比，計算其定量限，為0.738 mg/kg。

 

本方法優(yōu)化了高效液相色譜法檢測乳制品中三聚氰胺測定方法，該方法簡化了前處理步驟，易于操作，線性關(guān)系良好，有較好的精密度和重現(xiàn)性，回收率滿足國家標(biāo)準(zhǔn)的要求，檢出限和定量限也符合目前三聚氰胺的檢測要求。