農(nóng)業(yè)儀器網(wǎng)

農(nóng)作物種子純度鑒定方法綜述3

來源: 種子與種苗  類別:技術(shù)文章  更新時(shí)間:2008-05-12  閱讀

4分子標(biāo)記鑒定法

廣義的分子標(biāo)記是指可遺傳的并可檢測(cè)的DNA序列或蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)標(biāo)記包括種子貯藏蛋白和同工酶(指由一個(gè)以上基因位點(diǎn)編碼的酶的不同分子形式)及等位酶(指由同一基因位點(diǎn)的不同等位基因編碼的酶的不同分子形式)。狹義的分子標(biāo)記概念只是指DNA標(biāo)記,而這個(gè)界定現(xiàn)在被廣泛采納。由于DNA分子中堿基的缺失、插入、易位、倒位、重排或由于長(zhǎng)短與排列不一的重復(fù)序列等而產(chǎn)生多態(tài)性,DNA分子標(biāo)記便是檢測(cè)這種多態(tài)性的技術(shù),故DNA分子標(biāo)記技術(shù)又稱作分子診斷技術(shù)。分子標(biāo)記能反映生物個(gè)體或種群間基因組中某種差異特征的DNA片段,它直接反映基因組DNA間的差異。與上述三種鑒定法相比較,分子標(biāo)記具有許多明顯的優(yōu)點(diǎn),表現(xiàn)為:(1)直接以DNA的形式表現(xiàn),在生物體的各個(gè)組織、各個(gè)發(fā)育階段均可檢測(cè)到,不受季節(jié)、環(huán)境限制,不存在表達(dá)與否等問題;(2)數(shù)量極多,遍布整個(gè)基因組,可檢測(cè)座位幾乎無限;(3)多態(tài)性高,自然界存在許多等位變異,無須人為創(chuàng)造;(4)表現(xiàn)為中性,不影響目標(biāo)性狀的表達(dá);(5)許多標(biāo)記表現(xiàn)為共顯性的特點(diǎn),能區(qū)別純合體和雜合體,提供完整的遺傳信息。分子標(biāo)記的這些優(yōu)點(diǎn),使它己廣泛用于植物分子圖譜的構(gòu)建、植物遺傳多樣性分析與種質(zhì)鑒定、重要農(nóng)藝性狀基因定位與圖位克隆、轉(zhuǎn)基因植物鑒定、子標(biāo)記輔助育種選擇等生命科學(xué)的理論和應(yīng)用研究中。

生物在長(zhǎng)期的進(jìn)化過程中產(chǎn)生了許多由DNA堿基序列變異所致的可遺傳變異。這些DNA堿基序列變異主要有DNA重排、堿基替換、缺失、插入、倒位、易位和序列重復(fù)等多種形式。分子標(biāo)記技術(shù)正是以物種內(nèi)這種存在著極為豐富的DNA堿基序列變異為基礎(chǔ)而開發(fā)起來的。

41 RFLP (Restr iction fragment length pOlymorphism,限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性標(biāo)記)

該技術(shù)由Grodzicker等于1974年創(chuàng)立,1980年由Botstein再次提出,并由SOLLERBotstein(1983)最先應(yīng)用于品種鑒別和品系純度的測(cè)定,這是第一個(gè)被應(yīng)用于遺傳研究的DNA分子標(biāo)記技術(shù)。

RFLP是在分子克隆技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種遺傳標(biāo)記。特定生物類型的基因組DNA,經(jīng)某一種限制性內(nèi)切酶完全酶解后,會(huì)產(chǎn)生分子量不同的同源等位片段,或稱限制性等位片段。RFLP標(biāo)記技術(shù)的基本原理,就是通過電泳的方法分離和檢測(cè)這些片段。凡是可以引起酶解位點(diǎn)變異的突變,如點(diǎn)突變(新產(chǎn)生和去除酶切位點(diǎn))和一段DNA的重新組織(如插入和缺失造成酶切位點(diǎn)間的長(zhǎng)度發(fā)生變化)等,均可導(dǎo)致限制性等位片段的變化,從而產(chǎn)生RFLP多態(tài)性。該技術(shù)包括以下基本步驟:DNA提;用DNA限制性內(nèi)切酶消化;凝膠電泳分離限制性片段;將這些片段按原來的順序和位置轉(zhuǎn)移到易操作的濾膜上;用放射性同位素或非放射性物質(zhì)標(biāo)記的DNA作探針與膜上的DNA雜交(Southern雜交);放射性自顯影或酶學(xué)檢測(cè)顯示出不同材料對(duì)該探針的限制性酶切片段多態(tài)性,即可產(chǎn)生和獲得反映生物個(gè)體或群體特異性的RFLP圖譜。RFLP分析中所使用的探針,通常是隨機(jī)克隆的與被檢測(cè)物具有一定同源性的單拷貝或低拷貝基因組片段或cDNA片段。

RFLP指紋圖譜的優(yōu)點(diǎn)主要表現(xiàn)在:第一,可靠性較高。因?yàn)樗上拗菩詢?nèi)切酶切割特定位點(diǎn)產(chǎn)生;第二,來源于自然變異。依據(jù)DNA上豐富的堿基變異無需任何誘變劑處理;第三,多樣性。通過酶切反應(yīng)在DNA水平上來反映所有差異,且RFLP標(biāo)記遍布于整個(gè)基因組,故而在數(shù)量上幾乎沒有任何限制;第四,共顯性。RFLP標(biāo)記能夠區(qū)別雜合體與純合體;第五,無表型效應(yīng)。不受發(fā)育階段及器官特異性限制。

但是RFLP指紋技術(shù)也有其固有的缺陷,首先是操作煩瑣,相對(duì)費(fèi)時(shí)、周期長(zhǎng),且DNA需要量大、要求高,檢測(cè)技術(shù)繁雜;其次是具有種屬特異性,且只適應(yīng)單/低拷貝基因,限制了其實(shí)際應(yīng)用;再次,RFLP標(biāo)記通常要使用同位素雜交,對(duì)實(shí)驗(yàn)員健康極為不利。即使用非放射性的Southern雜交技術(shù),仍然耗時(shí)費(fèi)力。最后它最主要的缺點(diǎn)是由于它的信息產(chǎn)生是因?yàn)閴A基突變而導(dǎo)致的限制性酶切位點(diǎn)的丟失或獲得,所以RFLP多態(tài)位點(diǎn)數(shù)僅1~2個(gè),多態(tài)信息含量低,僅o.2左右。故而RFLP標(biāo)記存在一定的局限性,較難以用于大規(guī)模的育種實(shí)踐中。
  • 中國(guó)農(nóng)業(yè)儀器網(wǎng)】聲明部分文章轉(zhuǎn)載自其它媒體,轉(zhuǎn)載目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé),且不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)和其它問題,請(qǐng)?jiān)?0日內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系。
top
推薦儀器
智能人工氣候箱 TP-R系列
型號(hào):TP-R系列
智能蟲情測(cè)報(bào)燈 TPCB-II-C7.0 plus/TPCB-III-C7.0 plus
型號(hào):TPCB-II-C7.0 plus/TPCB-III-C7.0 plus

©2024 http://m.askacustomsbroker.com 版權(quán)所有:浙江托普云農(nóng)科技股份有限公司

地址:杭州市拱墅區(qū)祥園路88號(hào)中國(guó)(杭州)智慧信息產(chǎn)業(yè)園I座11-13樓

聯(lián)系電話:0571-86056609 0571-86059660 0571-88971438

售后服務(wù)專線:400-672-1817

浙ICP備09083614號(hào)

免費(fèi)咨詢

  • 在線詢價(jià): QQ
  • 南:13388425012
  • 微信客服
  • 北:19032001373
  • 微信客服