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油菜籽硫甙的測(cè)定-光度法

來(lái)源: 中國(guó)糧油儀器網(wǎng)  類(lèi)別:技術(shù)文章  更新時(shí)間:2005-01-17  閱讀

1.范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了采用光度法測(cè)定油菜籽中硫甙含量的方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于油菜常規(guī)育種、雜交三系、兩系育種、輻射育種以及生物技術(shù)選育中芥酸硫甙含量檢測(cè)以及油菜種子和商品油菜籽收購(gòu)過(guò)程中硫甙含量快速測(cè)定。

2.原理

利用酶的專(zhuān)一性,油菜籽中硫甙與特異性酶(Gln MEN)反應(yīng)后,生成產(chǎn)物與專(zhuān)用顯色劑(Chrom G)反應(yīng)形成有特征吸收峰的有色產(chǎn)物,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定硫甙含量。

3.試劑

除特殊標(biāo)明外,所有試劑均為分析純(A.R),水為GB/T6682規(guī)定的二級(jí)水。

3.1 硫甙測(cè)定A液。

3.2 硫甙測(cè)定B液。

3.3 硫甙測(cè)試板。

4.儀器設(shè)備

實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器及下列各項(xiàng)。

4.1 微型粉碎機(jī)。

4.2 電子天平(量程 0-200 g,最小讀數(shù)100 mg)。

4.3 40-200 μL微量移液器。

4.4 1000 μL微量移液器。

4.5 脫脂棉。

4.6 石英比色杯(18 mm×18 mm)。

4.7 芥酸硫甙速測(cè)儀。

5.取樣

按照GB5491扦取油菜籽樣品,取樣時(shí),應(yīng)清除樣品外來(lái)雜質(zhì)。

6.操作步驟

6.1 試樣的制備

按照GB5491對(duì)扦取的油菜籽樣品進(jìn)行縮分,取其中一份樣品約10 g在微型粉碎機(jī)中粉碎20秒,將粉碎物混勻,再粉碎5秒(亦可用研缽將樣品研碎過(guò)40目篩)。

6.2 稱(chēng)樣

準(zhǔn)確稱(chēng)取0.50 g(精確到100 mg)樣品于5 mL具塞試管中。

6.3 提取

用移液管加入3 mL硫甙測(cè)定A液,蓋緊蓋子,用力搖動(dòng)試管,混勻后反應(yīng)8分鐘(中途再混勻兩次)。

6.4 過(guò)濾

用玻璃棒將蓬松、紋路一致、適量的脫脂棉緩緩塞入試管中,當(dāng)脫脂棉接觸液面后,將試管平放桌面上,讓脫脂棉自動(dòng)吸液,吸滿后,豎起離心管再用玻璃棒將脫脂棉往下輕壓,至濾出清液為止,也可采用離心或?yàn)V紙過(guò)濾得到上清液。

6.5 酶-顯色反應(yīng)

取出密封保存的硫甙測(cè)試板(可分條取用,其它密封,避光保存),用微量移液器取50 μL 上清液于測(cè)試板孔中,同時(shí)選一孔加入50 μL硫甙測(cè)定B液作為空白;酶解反應(yīng)8min,中途用吸耳機(jī)吹氣兩次,使酶解反應(yīng)均勻一致。

6.6 顯色液稀釋

用微量移液器取150 μL硫甙測(cè)定B液,分別加入空白孔及樣品孔中,繼續(xù)反應(yīng)2min,中途吹氣一次,使體系均勻穩(wěn)定。

6.7 測(cè)定

在芥酸硫甙速測(cè)儀上,以試劑空白作零點(diǎn),選擇“儀器校準(zhǔn)”,記憶零點(diǎn)值,然后選擇“樣品測(cè)量”,即可進(jìn)行樣品測(cè)試分析,讀數(shù)值即為每克油菜餅粕中所含硫甙總量的微摩爾數(shù)(μmol/g)。

7.精密度和允許誤差

重復(fù)測(cè)定相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于6%;兩次平行測(cè)定結(jié)果芥酸相差小于0.8%;兩次平行測(cè)定結(jié)果硫甙相差小于4.0μmol/g。測(cè)定結(jié)果用算術(shù)平均值表示。

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