轉(zhuǎn)基因 Cry2A 試劑盒

【原理】
轉(zhuǎn)基因 Cry2A 試劑盒/轉(zhuǎn)基因檢測試劑盒系用特異性抗 Cry2A 單抗包被的微孔板和酶標記抗 Cry2A 單抗，雙抗體夾心法檢測 Cry2A 基因表達產(chǎn)物，可以高靈敏度和特異性的檢測轉(zhuǎn)基因植物中的 Bt-Cry2A 蛋白。

【試劑盒組份（規(guī)格）】
預包被板（抗 Cry2A 單抗）      12 孔×8
Cry2A 酶標抗體                 12 ml×1 瓶
20×濃縮洗滌液                      30 ml×1 瓶
5×抽提液/稀釋緩沖液                30 ml×1 瓶
底物液 A                            7 ml×1 瓶
底物液 B                            7 ml×1 瓶
終止液                              7 ml×1 瓶
使用說明書                          1 份
0ppb 陰性對照                       1ml
3 個不同濃度的標樣：
1 ppb， 5 ppb，10 ppb            各 1ml

【試劑準備】
試劑盒中的 20×濃縮洗滌液 30 ml 加 570 ml 滅菌 ddH2O 溶解稀釋至 1×洗滌液，
5×抽提液（30 ml）加 120 ml ddH2O 稀釋至 1×抽提液，4 ℃存放備用。

【樣品準備】
稱取約 20 mg 葉片，加 0.5 ml 1×抽提液（使用前 30 min 放置室溫）研磨至勻漿，室溫放置 30 min，測定前把樣品上清液稀釋 5-20 倍。
測定莖干和胚乳中的 Bt 蛋白時，樣品稱取約 40 mg，加 1ml 1×抽提液研磨。

【ELISA 反應】
1. 依次加 100 μl 陰性對照，標準品（3 個不同濃度的標樣： 1 ppb， 5 ppb，10ppb）和待測樣品至 96 孔板；
2. 用封口膜蓋住 96 孔板，快速搖動平板混勻樣品；
3. 37 ℃恒溫箱孵育 30 min；
4. 倒掉 96 孔板中液體，用 1×洗滌液每孔 250 μl 洗滌微孔板，漂洗 5 次，用吸水紙拍干；
5. 按順序在每個小孔中加入 100 μl Cry2A-酶標抗體，然后重復步驟 2；
6. 37 ℃恒溫箱孵育 30 min；
7. 倒掉 96 孔板中液體，用 1×洗滌液每孔 250 μl 洗滌微孔板，漂洗 5 次，用吸水紙拍干；
8. 依次加入 50 μl 底物 A 液，50 μl 底物 B 液，重復步驟 2；
9. 37℃恒溫箱孵育 10 min，加 50μl 終止液，充分混勻終止反應，15 min 以內(nèi)在酶標儀上讀取結(jié)果。在 450 nm 為主波長，630 nm 為次波長（或單波長 450 nm）下，用空白孔校零，再讀取各孔 OD 值。

【注意事項】
1. 測定中需使用的所有試劑和 96 孔板提前 30 min 放置室溫溫育（否則會影響試驗準確性），注意 12 連管必須溫育后再從平板上取下，未使用完的預包被板條應置于有干燥劑的封口袋中密封保存；
2. 試劑使用前應充分搖勻；
3. 搖動平板混勻時注意避免樣品之間交叉污染；
4. 使用洗滌液漂洗時，洗滌液需要填滿每個小孔，進行充分漂洗；
5. 研磨好的樣品如果不能一次全部測量，可以暫時在 4 ℃避光保存，但是最好在 24 h 內(nèi)測定；
6. 結(jié)果判讀請在反應終止后 15 min 內(nèi)完成。

【Bt 蛋白濃度計算公式】

Bt 蛋白濃度（μg/g）=

【儲存條件及有效期】
試劑盒儲存于 2-8℃，切勿凍存；未開封試劑盒有效期 12 個月，開封后 3 個月內(nèi)用完。（見包裝盒上標簽有效期）

【技術(shù)參數(shù)】
轉(zhuǎn)基因 Cry2A 試劑盒/轉(zhuǎn)基因檢測試劑盒適用于玉米、棉花、大豆以及其各種農(nóng)作物中轉(zhuǎn)基因成分的快速定性測試。

【產(chǎn)品編號】
規(guī)格：96孔
檢測樣本：種子/葉片
檢測時間：約2小時
有效期：12個月
儲存條件：2℃～8℃避光保存，切勿冷凍

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