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轉(zhuǎn)基因 Cry2A 試劑盒
【原理】
轉(zhuǎn)基因 Cry2A 試劑盒/轉(zhuǎn)基因檢測試劑盒系用特異性抗 Cry2A 單抗包被的微孔板和酶標記抗 Cry2A 單抗,雙抗體夾心法檢測 Cry2A 基因表達產(chǎn)物,可以高靈敏度和特異性的檢測轉(zhuǎn)基因植物中的 Bt-Cry2A 蛋白。
【試劑盒組份(規(guī)格)】
預包被板(抗 Cry2A 單抗) 12 孔×8
Cry2A 酶標抗體 12 ml×1 瓶
20×濃縮洗滌液 30 ml×1 瓶
5×抽提液/稀釋緩沖液 30 ml×1 瓶
底物液 A 7 ml×1 瓶
底物液 B 7 ml×1 瓶
終止液 7 ml×1 瓶
使用說明書 1 份
0ppb 陰性對照 1ml
3 個不同濃度的標樣:
1 ppb, 5 ppb,10 ppb 各 1ml
【試劑準備】
試劑盒中的 20×濃縮洗滌液 30 ml 加 570 ml 滅菌 ddH2O 溶解稀釋至 1×洗滌液,
5×抽提液(30 ml)加 120 ml ddH2O 稀釋至 1×抽提液,4 ℃存放備用。
【樣品準備】
稱取約 20 mg 葉片,加 0.5 ml 1×抽提液(使用前 30 min 放置室溫)研磨至勻漿,室溫放置 30 min,測定前把樣品上清液稀釋 5-20 倍。
測定莖干和胚乳中的 Bt 蛋白時,樣品稱取約 40 mg,加 1ml 1×抽提液研磨。
【ELISA 反應】
1. 依次加 100 μl 陰性對照,標準品(3 個不同濃度的標樣: 1 ppb, 5 ppb,10ppb)和待測樣品至 96 孔板;
2. 用封口膜蓋住 96 孔板,快速搖動平板混勻樣品;
3. 37 ℃恒溫箱孵育 30 min;
4. 倒掉 96 孔板中液體,用 1×洗滌液每孔 250 μl 洗滌微孔板,漂洗 5 次,用吸水紙拍干;
5. 按順序在每個小孔中加入 100 μl Cry2A-酶標抗體,然后重復步驟 2;
6. 37 ℃恒溫箱孵育 30 min;
7. 倒掉 96 孔板中液體,用 1×洗滌液每孔 250 μl 洗滌微孔板,漂洗 5 次,用吸水紙拍干;
8. 依次加入 50 μl 底物 A 液,50 μl 底物 B 液,重復步驟 2;
9. 37℃恒溫箱孵育 10 min,加 50μl 終止液,充分混勻終止反應,15 min 以內(nèi)在酶標儀上讀取結(jié)果。在 450 nm 為主波長,630 nm 為次波長(或單波長 450 nm)下,用空白孔校零,再讀取各孔 OD 值。
【注意事項】
1. 測定中需使用的所有試劑和 96 孔板提前 30 min 放置室溫溫育(否則會影響試驗準確性),注意 12 連管必須溫育后再從平板上取下,未使用完的預包被板條應置于有干燥劑的封口袋中密封保存;
2. 試劑使用前應充分搖勻;
3. 搖動平板混勻時注意避免樣品之間交叉污染;
4. 使用洗滌液漂洗時,洗滌液需要填滿每個小孔,進行充分漂洗;
5. 研磨好的樣品如果不能一次全部測量,可以暫時在 4 ℃避光保存,但是最好在 24 h 內(nèi)測定;
6. 結(jié)果判讀請在反應終止后 15 min 內(nèi)完成。
【Bt 蛋白濃度計算公式】
Bt 蛋白濃度(μg/g)=
【儲存條件及有效期】
試劑盒儲存于 2-8℃,切勿凍存;未開封試劑盒有效期 12 個月,開封后 3 個月內(nèi)用完。(見包裝盒上標簽有效期)
【技術(shù)參數(shù)】
轉(zhuǎn)基因 Cry2A 試劑盒/轉(zhuǎn)基因檢測試劑盒適用于玉米、棉花、大豆以及其各種農(nóng)作物中轉(zhuǎn)基因成分的快速定性測試。
【產(chǎn)品編號】
規(guī)格:96孔
檢測樣本:種子/葉片
檢測時間:約2小時
有效期:12個月
儲存條件:2℃~8℃避光保存,切勿冷凍
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