葉綠素含量測定方法

葉綠素是光合作用所必須的物質，沒有葉綠素，就不可能正常地進行光合作用，使光能轉化為化學能。葉綠素可見于綠色植物，藍綠藻等生物體，分為葉綠素a，葉綠素b，葉綠素c，葉綠素d四種。葉綠素存在于葉綠體的類囊體內。

葉綠素含量測定的三種方法

葉綠素含量跟光合作用速率、植物營養(yǎng)狀況等指標密切相關，通常，我們會通過對葉綠素含量的測定，來了解植物的生長狀況。一般，植物葉綠素含量測定有三種：分光光度法，活體葉綠素儀法和光聲光譜法。其中分光光度法是應用最廣泛的葉綠素含量測定方法。

圖　珊瑚樹葉片葉綠素在不同提取液中的吸收光譜

1——95% 丙酮2乙醇       2——95% 乙醇

           3——80% 丙酮             4——95% 丙酮2乙醇(勻漿)

葉綠素含量的計算

葉綠素含量測定首先得提取葉綠體色素，葉綠體色素中含有葉綠體a，葉綠體b，胡蘿卜素和葉黃素。在提取葉綠體色素時，我們使用不同的試劑，如丙酮，乙醇等有機物。當試劑不同時，所得到的結果也會不同。上圖中我們使用四種不同的溶劑，進行葉綠體色素的提取。圖中通過對四種溶劑在600nm-700nm波長間的吸光量進行比較，從而計算葉綠素含量，而從圖中，我們可以大致得到，這四種葉綠素提取液的光吸收性質基本相同。

利用分光光度法測定葉綠素含量是依據Lambert-Beer定律，數學表達式為A=Kbc。其中，A為吸光度；K為吸光系數；b為溶液的厚度；c為溶液濃度。

葉綠素a,b的丙酮溶液在可見光范圍內的最大吸收峰分別在663nm和645nm處。葉綠素a和b在663nm處的吸光系數分別為82.04和9.27；在645nm處的吸光系數分別為16.67和45.60。根據Lambert-Beer定律，我們可以列出方程：

D663 = 82.04Ca+9.27Cb

D645 = 16.67Ca+45.60Cb

根據以上方程組，可以求得：

Ca = 12.72D663 – 2.59D645

Cb = 22.88D645 – 4.67D663

然后我們又可求得葉綠素總量CT =（D652 × 1000）/ 34.5

上圖是不同的葉綠素提取液在提取葉綠素時的進度，可以看出，差別還是挺大的。大家可自己比較下。從圖中我們可以發(fā)現，95% 丙酮2乙醇(勻漿)的提取效果最佳，因此，我們在進行葉綠素含量測定的時候，可以考慮運用95% 丙酮2乙醇(勻漿)作為提取液。

那么，目前我們已經發(fā)明了比較方便的用于測量葉綠素含量的儀器—葉綠素含量測定儀，它是通過測量植物的葉綠素相對含量來了解土壤的性能指標和植物的硝基需求量，并了解植物的生長狀況。

圖 葉綠素含量測定儀

葉綠素含量測定儀的技術參數